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這里有兩種主要的方法。較早的硫代巴比妥酸方法(或其變體)現在用得不多。這是一種化學方法,可測量與血紅蛋白結合的葡萄糖總量。結果可以表示為每摩爾血紅蛋白或血紅素的葡萄糖或果糖胺的摩爾數,并使用校準圖轉換成%HbA1c。這一類更流行的方法是硼酸鹽親和程序。這使用苯基硼酸酯連接到惰性樹脂上。苯基硼酸酯結合順式羥基,例如與血紅蛋白相連的葡萄糖。血液通過硼酸鹽親和柱,導致糖化血紅蛋白與樹脂結合,未糖??化血紅蛋白被直接洗脫。使用競爭性硼酸鹽結合化合物如山梨糖醇將結合的糖化級分從柱中釋放出來。確定糖化血紅蛋白與總血紅蛋白的比例,并將其乘以由校準圖或公式確定的因子,將其轉換為%HbA1c。假定這個比例是恒定的。換言之,天然(體內)糖化的模式被認為對于所有患者和糖基化水平是相同的。該方法將給每個分子連接兩個葡萄糖的血紅蛋白作為每個分子具有一個葡萄糖的血紅蛋白的HbA1c結果相同。相比之下,硫代巴比妥酸法將測量具有2個連接的葡萄糖殘基的血紅蛋白的量是具有一個葡萄糖的血紅蛋白的兩倍。